無菌技術(shù)學(xué)習(xí)心得
下面就是小編帶來的無菌技術(shù)學(xué)習(xí)心得，希望能幫助大家!
無菌技術(shù)學(xué)習(xí)心得1
無菌操作基本技術(shù)
1.在開始實(shí)驗(yàn)前要制定好實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和操作程序。有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算要事先做好。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，準(zhǔn)備各種所需器材和物品、清點(diǎn)無誤后將其放于操作場所(培養(yǎng)室、超凈臺)內(nèi)，然后開始消毒，以避免往返拿取造成污染機(jī)率增大。
超凈工作臺臺面每次實(shí)驗(yàn)前用75%酒精擦拭，按照頂板→側(cè)壁→器械→擋風(fēng)玻璃→操作臺面的順序?qū)Τ瑑襞_內(nèi)部進(jìn)行徹底的消毒。然后開啟超凈臺和無菌培養(yǎng)室的紫外燈照射30min，關(guān)閉紫外，啟動風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)15分鐘后，方可開始實(shí)驗(yàn)操作。在工作臺面消毒時切勿將培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)用液同時照射紫外線。
2. 無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流流通。實(shí)驗(yàn)用品以75 % 酒精擦拭后放入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在臺面中央的無菌區(qū)域，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。
3. 小心取用無菌實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖端或容器瓶口，亦不要在開口容器的正上方操作。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45°角取用。
4. 操作人員應(yīng)注意自身安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對于來自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺。操作過程中，應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO，并避免尖銳針頭的傷害等。
5. 每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同也不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。為拿取方便，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于中央。工作由始至終要保持一定順序性，組織或細(xì)胞在未做處理之前，勿過早暴露在空氣中。同樣，培養(yǎng)液在未用前，不要過早開瓶;用過之后如不再重復(fù)使用，應(yīng)立即封閉瓶口。
6. 實(shí)驗(yàn)完畢后，關(guān)閉超凈臺風(fēng)機(jī)，以75 %酒精擦拭操作臺面及其他實(shí)驗(yàn)物品，將多余的物品拿出超凈臺，打開風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)15 min，關(guān)閉風(fēng)機(jī)并打開紫外燈照射30min。
7. 定期檢測CO2 鋼瓶的CO2 壓力 ; CO2 培養(yǎng)箱的CO2 濃度、溫度、水盤是否有污染(水盤的水為無菌水，每周更換);定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)(300小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000 小時/HEPA)。
預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的最好辦法。只有預(yù)防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度。
一般預(yù)防可從以下幾方面著手：
1、添加抗生素
2、從物品、用品消毒滅菌著手
(1)細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌除菌要仔細(xì)，并在無菌試驗(yàn)陰性后才能使用。
(2)操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。
3、從操作者做起
(1)進(jìn)無菌室前要用肥皂洗手，按規(guī)定穿隔離衣。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
(2)操作者動作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口轉(zhuǎn)動燒灼。操作時盡量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面。
(3)操作時要常更換吸管，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去。實(shí)驗(yàn)完畢用消毒水浸泡的紗布擦臺面。
4、防止細(xì)胞交叉污染
(1)在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分。吸取營養(yǎng)液、PBS、細(xì)胞懸液
及其它各種用液時，均應(yīng)分別使用吸管，不能混用，以防擴(kuò)大污染或?qū)е录?xì)胞交叉污染。
(2)在進(jìn)行換液或傳代操作時，手或注射器、滴管等不能經(jīng)過開口瓶口上方，不能觸及瓶口，以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。加液時如吸管尖碰到瓶口，則應(yīng)將吸管丟掉。
(3)細(xì)胞一旦購置或從別處引入，均應(yīng)及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇培養(yǎng)。
5、無菌室的徹底消毒
(1) 0.1%新潔爾滅全面徹底擦洗無菌室;
(2)甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑菌，其水溶液和氣休對各種細(xì)菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。
容器破碎及感染性物質(zhì)的溢出的處理：
1 小玻璃瓶及其他容器等被傳染性物質(zhì)污染的破碎物品，以及培養(yǎng)物等濺灑的傳染性物質(zhì)，應(yīng)當(dāng)立即佩戴手套用布或紙巾覆蓋。
2 在上面倒上消毒劑，并使其作用適當(dāng)時間。
3 清理破碎物品及污染物，再用消毒劑擦拭污染區(qū)域。
4 用于清理的布等應(yīng)當(dāng)放在盛放污染性廢棄物的容器內(nèi)。
5 如果實(shí)驗(yàn)表格或其他材料被污染，在妥善轉(zhuǎn)抄或拷貝后，應(yīng)當(dāng)將其棄入污染廢棄物容器。